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      1. EX6010 高效RIPA裂解液(組織/細胞)

        別名 : 蛋白提取試劑盒

        英文名稱 : RIPA buffer(high)

        儲存條件 : -20°C

        單位 : 瓶


        現價:
        ¥60.00
        原價:
        ¥0.00
        * 規格 :
        數量:
        - +
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        • 商品介紹
        • 規格參數
        • 本品為高效組織細胞裂解液。主要用于從動物組織和動物細胞中抽取的可溶性蛋白。組織活細胞本產品配有一支PMSF(0.3ml/1.5ml)

          使用說明

          如發現RIPA有沉淀,請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。

          根據使用量,取每1ml RIPA 加入10ul PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。混勻備用 (PMSF現用現加)。

          1、樣品前處理:

          a)對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。

          b)對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管,然后再裂解。

          c)對于組織樣品: 把組織剪切成細小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量)。

          用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

          2、后處理:

          將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

          注意事項 :

          本試劑為強烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同時,也會將基因組一并釋放出來,造成細胞裂解液粘稠,此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液,煮沸再離心,離心后直接上樣電泳;若想測定濃度,可入加少量 SDS(1%),煮沸后離心測濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑,所以不適合使用Bradford蛋白濃度測定試劑盒,請選擇BCA法或者Lowry法檢測蛋白濃度。

          如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物,隨后離心取上清用于后續實驗。


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