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      1. 價格:

        ¥320.00

        PN0120 BCA蛋白濃度測定試劑盒

        英文名稱 : BCA Protein Assay Kit

        儲存條件 : 按要求儲存,有效期1年

        單位 : 盒



        • 產品詳情
        • 產品屬性

        BCA法蛋白濃度測定試劑盒使用說明書

        貨號:PN0120

        規格:500微孔/10000微孔    

        保質期:有效期1年。

        產品內容:                        

        試劑名稱

        包裝(500微孔)

        保存

        BCA試劑

        100mL

        室溫

        Cu試劑

        3mL

        室溫

        PBS稀釋液

        30mL

        室溫

        BSA蛋白標準 (5mg/mL BSA)

        1mL

        -20

        產品簡介:

             堿性條件下,蛋白將Cu2+還原為Cu+ Cu+BCA試劑形成紫藍色的絡合物,測定其在562nm處的吸收值,并與標準曲線對比,即可計算待測蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDSTriton X-100Tween不影響檢測結果,但受螯合劑(EDTAEGTA)、還原劑(DTT,巰基乙醇)和脂類的影響。實驗中,若發現樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高,可試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

        操作說明:

        微孔酶標儀法

        1、  配制工作液:根據標準品和樣品數量,按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑(50:1)配制成BCA工作液,充分混勻(混合時可能會有渾濁,但混勻后就會消失)BCA工作液室溫24小時內穩定。

        2、  稀釋標準品:取10μL BSA標準品用PBS稀釋至100μL(樣品一般可用PBS稀釋),使終濃度為0.5mg/mL。將標準品按0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20μL加到96孔板的蛋白標準品孔中,加PBS補足至20μL

        3、  將樣品作適當稀釋(最好多做幾個梯度,如作2倍、4倍、8倍稀釋),加20μL96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量樣品時誤差偏大,標準線前面的點可能不很準確,所以盡可能的讓樣品點落在標準線1/2后。

        4、  各孔加入200μL BCA工作液,37放置15-30分鐘。用酶標儀測定A562nm,根據標準曲線計算出蛋白濃度。使用溫箱孵育時,應注意防止因水分蒸發影響檢測結果。

        分光光度計法

               如沒有酶標儀,可用分光光度計在離心管中混勻后加入比色皿中比色。

               步驟如下:

        1、  配制工作液: 根據標準品和樣品數量,按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑(50:1)配制成BCA工作液,充分混勻(混合時可能會有渾濁,但混勻后就會消失)BCA工作液室溫24小時內穩定。

        2、  稀釋標準品:取100μL BSA標準品用PBS稀釋至1mL(樣品一般可用PBS稀釋),使終濃度為0.5mg/mL

        3、  取八支(或者更多)5mL離心管,標上號,按下表加入試劑。

         

        離心管號

        1

        2

        3

        4

        5

        6

        7(樣品管1

        8(樣品管2

        9(樣品管3

        標準蛋白BSA

        0

        40μL

        80μL

        120μL

        160μL

        200μL

        200μL適當稀釋的樣品1

        200μL適當稀釋的樣品2

        ……

        PBS

        200μL

        160μL

        120μL

        80μL

        40μL

        0

        0

        0

        0

        BCA工作液

        2mL

        2mL

        2mL

        2mL

        2mL

        2mL

        2mL

        2mL

        2mL

        4、  37放置15-30分鐘。用分光光度計測562nm處吸光值,根據標準曲線計算出蛋白濃度。          

        注意事項:

        1、  長期不用時,Cu試劑與PBS稀釋液可置于2-8保存,如發現細菌污染則應丟棄。BCA試劑在低溫條件下出現結晶沉淀時,可37溫育使其完全溶解, 不影響使用。

        2、  樣品中若含有較多干擾物質時,請采用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

        3、  為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

         


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